CRISPR/Cas13a具有RNA引導(dǎo)的RNA切割能力，RNA引導(dǎo)反式核酸內(nèi)切酶活性是高度特異的，高效切割ssRNA，每個(gè)激活Cas13a蛋白可以識(shí)別10⁴ 拷貝RNA。CRISPR/Cas13a強(qiáng)大信號(hào)放大能力使RNA檢測(cè)靈敏度能夠降低到飛摩爾（10^-15M）水平。

基于CRISPR/Cas13的信號(hào)放大能力，建立CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay，簡(jiǎn)稱“CLISA”

1、CLISA檢測(cè)原理

CLISA是CRISPR-based單分子免疫診斷技術(shù)平臺(tái)，靈敏度達(dá)fM或fg/mL，精準(zhǔn)分析多種疾病的超低濃度生物標(biāo)志物。

結(jié)合傳統(tǒng)三明治結(jié)構(gòu)免疫結(jié)合機(jī)制，用含有T7啟動(dòng)子序列生物素化雙鏈DNA（dsDNA）取代酶放大體系。T7聚合酶識(shí)別啟動(dòng)子序列進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生大量單鏈RNA分子拷貝。crRNA識(shí)別轉(zhuǎn)錄RNA分子導(dǎo)致CRISPR/Cas13反式切割活性激活。兩端熒光團(tuán)和猝滅基團(tuán)標(biāo)記的短ssRNA報(bào)告探針通過反式切割活性被切割。

相較于傳統(tǒng)免疫檢測(cè)方法ELISA，CLISA靈敏度可提升1,000倍，檢測(cè)限達(dá)到fm/mL或fg/mL。

      2、主要試劑組分

3、試劑盒檢測(cè)性能

 反應(yīng)時(shí)間：3小時(shí)  (免疫反應(yīng)0.5小時(shí)，轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1小時(shí)，Cas熒光信號(hào)檢測(cè)0.5小時(shí)

 線性范圍：50fg/mL~5ng/mL

 最低檢測(cè)限：10fg/mL

4. 開發(fā)產(chǎn)品線

       CLISA主要用于fmol濃度的診斷標(biāo)志物的臨床產(chǎn)品開發(fā)。